人類血清來(lái)源于非免疫的鼠宿主，經(jīng)過(guò)脂質(zhì)萃取PBS溶液透析，改善其透明度。推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細(xì)胞涂片上，37℃度孵育10-30分鐘，清除血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過(guò)夜。注意：封閉用血清中不能含有目標(biāo)蛋白，且與一抗來(lái)源不同，可用與二抗相同來(lái)源的封閉血清。
1、需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中，4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月。由于結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%，因此，在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?/div>
2、熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已解凍的血清。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻，此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活。除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成沉淀物增多，而且還會(huì)影響質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用，平滑肌細(xì)胞收縮，肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺，增強(qiáng)吞噬作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：-20℃至-70℃低溫冰箱中的放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將其從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
